Dissertação

A disease modelling approach for Angelman syndrome based on neuronal differentiation of patient-derived iPSCs EVALUATED

O síndrome de Angelman (AS) é um distúrbio do neuro-desenvolvimento causado pela deficiência do gene UBE3A herdado pela mãe, exibindo imprinting paternal. Tendo em conta as características promissoras das células estaminais pluripotentes induzidas humanas (hiPSCs), foi criado um sistema robusto de modelação de doenças, mimetizando o processo de neurogénese in vitro. As iPSCs do controlo e paciente foram diferenciadas usando o protocolo dual-SMAD inhibition. A caracterização da população de iPSCs confirmou um estado pluripotente dessas células antes do protocolo de comprometimento neural. Durante esse protocolo as iPSCs foram monitorizadas por imunofluorescência (IF) e RT-qPCR para vários marcadores de diferenciação do dia 12 ao 80. A indução neural foi bem sucedida tanto para iPSCs controlo e do paciente. Durante este protocolo, o estado de metilação do PWS-IC que controla a regulação do imprinting do locus Angelman mostrou-se corretamente mantido, o que garante a viabilidade deste protocolo para modelar o AS. Finalmente, a expressão de UBE3A aumentou durante a diferenciação dos neurónios do controlo, sendo sempre superior à dos derivados do paciente, onde um decaimento gradual da expressão de UBE3A é notado. No entanto, no dia 80 a expressão de UBE3A não é totalmente cessada em neurónios derivados do paciente, sugerindo que um período de diferenciação mais longo pode ser necessário para que o UBE3A paterno seja completamente silenciado. Em conjunto, os resultados sugerem que o protocolo de dual-SMAD inhibition para diferenciação neuronal fornece um bom sistema para modelar o AS, sendo capaz de discernir fenótipos entre neurónios do controlo e paciente.
Síndrome de Angelman, UBE3A, Imprinting genómico, hiPSCs, Diferenciação neuronal

Novembro 20, 2018, 16:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

ORIENTADOR

Tiago Paulo Gonçalves Fernandes

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar

ORIENTADOR

Simão Teixeira da Rocha

Instituto de Medicina Molecular (iMM)

Investigador Auxiliar