Dissertação

Optimisation of a Xeno(geneic)-Free Microcarrier-Based Culture System for the Expansion of Human Mesenchymal Stem Cells EVALUATED

Células estaminais humanas derivadas do periósteo (hPDCs) são um tipo de célula atrativo e com potencial de aplicação em estratégias de regeneração do sistema esquelético. No entanto, a maioria dos protocolos de expansão recorre a soro fetal bovino (FBS) enquanto suplemento. Neste trabalho, é proposto um protocolo baseado na adição de 7.5% (v/v) de lisado de plaquetas humanas (hPL) ao meio basal. Devido à baixa disponibilidade de hPDCs em tecidos e às doses requiridas para tratamentos, é necessário desenvolver tecnologias escaláveis para expansão celular in vitro capazes de produzir densidades celulares significantes e garantir a funcionalidade e imunofenótipo celular. Assim, um sistema de cultura sem componentes xenogénicos, implementado em spinner flasks, é proposto para a expansão de hPDCs. Estudos usando onze microcarriers foram conduzidos de forma a selecionar os cinco mais promissores: Plastic Plus, Cytodex 1™, CultiSpher-S, Star Plus and Synthemax II Dissolvable. Na cultura com spinner flasks, os microcarriers Plastic Plus atingiram uma concentração celular máxima de (1.35±0.10) x 10^6 células/mL ao dia 7, representando um aumento de (40.68±2.91) relativamente ao número de células inoculadas. No final da cultura, menos de 20% das células foram recolhidas, realçando a necessidade de optimização adicional. A análise do metabolismo celular revelou que não existiu depleção de glucose durante a cultura, nem formação de lactato em concentrações inibitórias. Estes resultados representam um bom passo em direção à implementação de sistemas mais eficientes, seguros e rentáveis para a produção de hPDCs em larga escala, obedecendo às atuais diretrizes de Boas Práticas de Fabricação.
Células Estaminais Derivadas do Periósteo, Expansão com Microcarriers, Cultura em Spinner Flask, Lisado de Plaquetas Humanas

Novembro 29, 2018, 11:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

ORIENTADOR

Jean-Marie Aerts

Katholieke Universiteit Leuven

Full Professor

ORIENTADOR

Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar