Dissertação

Computational analysis of mitochondrial morphology and membrane potential EVALUATED

As mitocôndrias, organelos inicialmente dados como estáticos, têm sido alvo de estudos que permitiram a sua ligação com diversos mecanismos celulares. Dois parâmetros importantes e frequentemente estudados, morfologia e potencial mitocondrial, fornecem uma visão indicativa da saúde da célula. Na literatura atual, estas características são frequentemente observadas sequencialmente e a correlação estabelecida é sistematicamente causal - após infligir um estímulo externo sobre a célula, que afeta morfologia ou potencial, uma mudança no outro atributo é observada. Geralmente, a depleção do potencial leva a fragmentação mitocondrial, disfunção respiratória e, finalmente, morte celular. No entanto, a correlação entre potencial e morfologia mitocondrial, independente de fatores externos, tem sido ignorada. Assim, tentou-se determinar se tal correlação existia. Idealmente, um determinado fenótipo morfológico estaria associado com um potencial elevado, enquanto que a morfologia oposta estaria associada com potencial baixo. Para este fim, foi utilizado um protocolo de microscopia de fluorescência, com um sucessivo método de processamento de imagem. A linhagem celular utilizada foi MDA-MB-231, de adenocarcinoma mamário humano. Usando tanto simples extração de parâmetros e análise de clusters, a correlação entre potencial e morfologia não foi observável. Isto sugere que, sob condições de cultura normais, a população mitocondrial morfologicamente heterogénea de uma célula não apresenta sempre a mesma tendência de potencial. Adicionalmente, uma linhagem celular derivada da linhagem MDA-MB-231, mostrando maior capacidade invasiva/metastática, foi avaliada quanto ao fenótipo morfológico, em busca de uma diferença entre as linhagens parental e invasivos. Uma ligeira diferença foi encontrada apenas na presença do agente de desacoplamento de CCCP.
Mitocondria, potencial, morfologia, processamento de imagem, análise clusters, heterogeneidade

Dezembro 9, 2015, 18:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Denis Gaston Wirtz

The Johns Hopkins University

Professor

ORIENTADOR

João Miguel Raposo Sanches

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar