Dissertação
Investigation of the role of Base Excision Repair gene Xrcc1 in hematopoietic progenitor and stem cells EVALUATED
Os danos oxidativos no DNA, um dos eventos de danos endógenos no DNA mais frequentes, são maioritariamente reparados pelo mecanismo BER. Para garantir uma contínua hematopoiese, é importante que o dano no DNA que ocorre nas HPSCs seja reparado adequadamente, caso contrário, pode levar a doenças hematológicas ou disfunções. A nossa hipótese é que o Gene A, um dos genes de BER, desempenha um papel fundamental na funcionalidade das HPSCs. Consequentemente, o papel deste gene em HPSCs durante a expansão ex vivo e na repopulação in vivo foi investigado. Assim, realizou-se um KO/KD do gene A utilizando a tecnoclogia CRISPR-Cas9 em HPSCs primárias adultas do ratinho, utilizando duas sgRNAs diferentes. Para além disso, não foi detetada nenhuma modificação de CRISPR-Cas9 no genoma, nas regiões genómicas "off-targets", após 2 semanas de cultura. Durante 1 mês de cultura ex vivo, os nossos resultados sugerem que o KO do gene nas HPSCs parece ser afetado na sua capacidade de expansão ex vivo em comparação com as células de controlo. Finalmente, a funcionalidade in vivo do KO deste gene nas HPSCs durante a regeneração hematopoiética foi investigada, utilizando um ensaio de transplantação primário durante 20 semanas após o transplante. Os nossos resultados indicam que as células com o KO do gene A podem ter uma capacidade de repopulação reduzida em comparação com as células de controlo. Concluindo, esta tese demonstra resultados preliminares promissores de que o KO do gene A afeta a expansão das HPSCs, tal como a sua funcionalidade durante a hematopoiese regenerativa.
janeiro 19, 2021, 16:0
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
ORIENTADOR
Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Associado
