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Dissertação

Expansion of Human Induced Pluripotent Stem Cells on Dissolvable Microcarriers Under Dynamic Culture Conditions EVALUATED

Detalhes: hiPSCs são promissoras para aplicações biomédicas devido às capacidades de auto-renovação e diferenciação em todos os tipos de células do corpo humano. A produção in vitro de hiPSCs atinge elevados números usando processos livres de produtos animais, quimicamente definidos e de larga escala, estando a cultura com microcarriers entre os mais populares. Microcarriers apresentam desvantagens relativamente à recolha das células após expansão: células são deixadas na sua superfície ou perdidas durante a filtração – um processo não optimizado, particularmente considerando a produção em larga-escala. A Corning Inc. desenvolveu microcarriers baseados numa matriz digestível de pectina, que podem ser dissolvidos, usando pectinase, após expansão das hiPSCs, evitando um dos problemas da recolha de células, tornando a sua expansão mais economicamente viável. A expansão de hiPSCs foi testada em condições estáticas e dinâmicas em microcarriers dissolúveis (DM) e comparada com resultados em microcarriers de poliestireno (PSM). A adesão de hiPSCs foi semelhante nos dois tipos de microcarriers usando revestimentos iguais. A expansão atingiu valores superiores num tempo de cultura mais curto nos DM – 4.61±0.17x10^7 células em DM com revestimento de Matrigel® em meio E8™, e 3.80±0.73x10^7 células em Synthemax®II DM em meio mTeSR™1, em 5 dias de cultura. A eficiência de recuperação foi semelhante nos dois protocolos de recolha de células – 50.8±7.8% com incubação com protease e pectinase, 51.1±9.4% com incubação com protease e filtração. A preparação dos DM foi também mais simples e rápida. A expansão de hiPSCs em DM mostrou ser uma alternativa promissora aos PSM.
Keywords: Células Humanas Pluripotentes Induzidas, Microtransportadores dissolúveis, Expansão, Recolha de células, Spinner-flask, Scale-up

Discussão: novembro 23, 2016, 10:30