Dissertação
The impact of zwf overexpression on plasmid biopharmaceutical production by Escherichia coli EVALUATED
A utilização de DNA plasmídico tem vindo a aumentar ao longo dos anos, podendo ter como aplicação vacinas de DNA para doenças virais, bacteriológicas ou parasíticas ou outras indicações como cancro. Assim, é expectável que a necessidade de DNA plasmídico aumente significativamente num futuro próximo, sendo necessária a utilização de um processo de produção de alto rendimento a baixo custo. Com o objectivo de criar uma estirpe de E. coli adaptada aos desafios de upstream e downstream processing de DNA plasmídico em grande escala, determinadas mutações têm sido feitas ao seu genoma. Uma das principais estratégias utilizadas é a modificação de genes envolvidos no metabolismo central de carbono por forma a aumentar o fluxo na via de síntese de percursores de nucleótidos e aminoácidos e reduzir a formação de produtos secundários como o acetato. Assim, neste projecto foi feita a sobreexpressão de dois genes da via das pentoses fosfato, zwf e rpiA, na estirpe GALG20 (MG1655ΔendAΔrecAΔpgi) através da substituição dos promotores originais por outros com forças superiores. Os resultados obtidos mostram que a sobreexpressão do gene zwf não aumentou a produtividade de DNA plasmídico na estirpe GALG20, comportando-se de forma semelhante a estirpes GALG20rpiA.
novembro 21, 2014, 14:30
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