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Dissertação

Downstream processing of cell culture-derived animal viruses EVALUATED

Detalhes: A produção de vetores para terapia génica e vacinas virais requer uma concentração e purificação eficiente de vírus. Atualmente, os processos de downstream (DSP) são baseados em métodos de centrifugação diferencial. Estes métodos possuem baixos rendimentos, custos elevados, morosidade e difícil aumento de escala. O objetivo deste trabalho é responder a estes desafios, através do desenvolvimento e optimização de tecnologias alternativas, nomeadamente cromatografia monolítica e sistemas de duas fases aquosas (ATPS) para DSP do vírus Língua azul (BTV) a partir de sobrenadantes de células de rim de hamster bebé (BHK-21). Em relação ao ensaio cromatográfico do BTV, o melhor rendimento (80%) foi atingido usando 20 mM NaH2PO4 como tampão de adsorção e 20 mM NaH2PO4 com 1 mM MgCl2 e 2 M NaCl, como tampão de eluição a pH 7.2. Considerando ATPS, o melhor rendimento (89%) foi obtido usando 10% PEG 3350 Da e 3% dextrano 500 kDa a pH 7.0, com uma distribuição desigual para a fase de dextrano. Em ambas as técnicas, o BTV mostrou ser estável a uma gama estreita de pH. Adicionalmente foram efetuados estudos com o vírus Maedi Visna (MVV) sendo que a cromatografia monolítica se revelou não adequada para o processamento do sobrenadante. Distintivamente, ATPS provou ser uma alternativa viável. MVV mostrou preferência pela fase constituída por PEG, sendo o melhor sistema composto por 15% PEG 3350 Da, 10% fosfato a pH 6.0. Este trabalho apresenta diferentes técnicas para concentração de vírus e estabelece avanços científicos acerca das estratégias de DSP.
Keywords: Concentração de vírus, Cromatografia Monolítica, Sistemas de duas fases aquosas (ATPS), Vírus Língua azul (BTV), Vírus Maedi Visna (MVV)

Discussão: julho 8, 2014, 9:0