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Dissertação

Detection of Circulating miRNAs using Microfluidics - A Diagnosis Method for Cardiovascular Diseases EVALUATED

Detalhes: Microfluidica é dos avanços científicos mais inovadores, permitindo a criação de sistemas de elevada performance, com resultados precisos e menor exigência financeira, sendo a tecnologia ideal a adotar nos sistemas de diagnóstico. Este projeto consistiu na aplicação deste tipo de tecnologia no campo da deteção patológica. O número de moléculas de DNA hibridadas por unidade de área, foi determinada através de Spotting de DNA. Nas experiências de hibridação o sistema detetou maior número de moléculas por unidade de área nos resultados de hibridação de DNA complementar. Este resultado suporta o facto da fluorescência detetada após hibridação de DNA complementar ser sempre maior que a fluorescência de DNA não – complementar. Determinaram-se os parâmetros cinéticos Ka (2x107 M-1) e Kd (6x10-8 M) que sugerem a existência de uma grande afinidade entre a as moléculas de DNA complementar e as sondas. Detetou-se hibridação de DNA presente em concentrações pM e fM. As diferenças entre DNA complementar e DNA não-complementar foram possíveis de detectar para ambas as moléculas, em todas concentrações. Este resultado sugere que o sistema é capaz de detetar pequenas concentrações mas, não consegue detetar variações dentro de cada uma dessas concentrações. Finalmente, testou-se ainda a resposta do sistema face à presença de 2x10-6 M de DNA numa solução de matriz complexa (0.4g/L hSA), onde a deteção das moléculas de DNA complementar também foi possível. A diferença verificada nos níveis de fluorescência não pode ser associada exclusivamente à alteração da constituição da matriz, pois entre experiências iguais essa variabilidade ainda existe.
Keywords: Microfluidica, Detecção DNA, Fluorescência, Parâmetros Cinéticos, FRET, Spot DNA

Discussão: dezembro 12, 2013, 16:0

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