Dissertação
Establishment of a novel process for the purification of cutinase with triazine-scaffolded synthetic affinity ligands EVALUATED
A cutinase recombinante de Fusarium solani pisi é uma enzima que faz a ponte entre as propriedades funcionais de lipases e esterases, com potenciais aplicações nas indústrias de síntese química, de detergentes e alimentar. O método convencional de purificação da cutinase é um processo moroso que envolve dois passos de cromatografia aniónica e uma diálise final. A cromatografia de afinidade é o método mais eficaz para a purificação de proteínas. Ligandos biomiméticos desenhados de novo reconhecem alvos específicos na superfície das proteínas, formando interacções de elevada afinidade com a proteína-alvo e permitindo a sua purificação rápida e com baixo custo. A presente tese pretendeu estabelecer um novo método para a purificação de cutinase a partir de extractos proteicos impuros de E. Coli por cromatografia de afinidade, com ligandos de sintéticos baseados num esqueleto de triazina selecionados de uma biblioteca combinatorial específica para a cutinase. Ensaios realizados a diferentes escalas com um ligando líder selecionado e sintetizado de novo permitiram a purificação da cutinase num passo único de cromatografia de afinidade, com rendimentos de proteína e actividade de 25% e 89%, respectivamente, e um factor de purificação de 3.5, sob condições optimizadas. Os resultados obtidos demonstraram a potencialidade da cromatografia de afinidade com ligandos biomiméticos de afinidade para a purificação rápida e de baixo custo da cutinase.
novembro 29, 2013, 14:0
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Orientação
ORIENTADOR
Maria Ângela Cabral Garcia Taipa Meneses de Oliveira
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Auxiliar