Dissertação
Preparation and characterization of chitosan nanoparticles for gene delivery EVALUATED
O interesse na possibilidade de utilizar a terapia génica e as vacinas de DNA para o tratamento de doenças genéticas e adquiridas, como infecções, anomalias degenerativas ou cancro, tem vindo a aumentar devido ao desenvolvimento de vários métodos para a distribuição de genes de interesse em células de mamífero. Neste estudo, foi utilizado o polímero quitosano como vector não-viral para a distribuição do plasmídeo pVAX1GFP em células de ovário de ratinhos chineses, sendo o objectivo final a expressão da proteína verde fluorescente no núcleo destas células. As nanopartículas de quitosano e DNA plasmídico foram preparadas por “auto-montagem” a razões amina para fosfato de 5, 10, 20, 50 e 70. A complexação não foi total para as razões mais baixas. Quitosanos de diferentes pesos moleculares (60-220kDa) e um glicol quitosano foram testados, de modo a determinar a formulação em que a eficiência de transfecção era superior. Dois lípidos foram ainda usados para modificar a molécula de quitosano de modo a determinar se a sua presença afectaria a referida eficiência. Caracterizou-se o diâmetro (102 até 2094nm), o potencial zeta (-36 até 40mV) e o índice de polidispersão (0.21 até 0.89) das nanopartículas, de modo a seleccionar as que mais se adequavam para a distribuição celular. A sonicação das partículas de quitosano é um processo importante para a obtenção de nanoparticulas estáveis e homogéneas, características maioritariamente apresentadas pelos complexos com presença de quitosanos de baixo peso molecular (60-120kDa). Eficiências de transfecção elevadas foram apenas obtidas nos controlos positivos dos ensaios (pDNA + lipofectamina).
novembro 18, 2013, 17:30
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