Dissertação
Detection of protein cancer biomarkers in Magnetoresistive Biochip: case study of interleukin 6 EVALUATED
A tecnologia de biossensores representa uma alternativa promissora às metodologias aplicadas actualmente no diagnóstico do cancro. Na última década, tem havido um grande investimento no desenvolvimento da aplicação de nanopartículas magnéticas associadas a plataformas de biossensores magnetoresistivos (MR). O objectivo deste trabalho foi a optimização das condições necessárias ao bioreconhecimento do biomarcador interleucina 6 (IL-6) utilizando a detecção através de imunossensores baseados em magnetoresistivos. Para tal, anticorpos específicos anti IL-6 foram imobilizados na superfície de nanopartículas magnéticas (250 nm). Foram realizadas quatro químicas de funcionalização (ligação por afinidade através da proteína A e da ligação biotina-estreptavidina, imobilização dirigida por oxidação de hidratos de carbono e EDC / Sulfo-NHS). Verificou-se que o número de moléculas de anticorpo imobilizadas aumenta com o aumento da concentração inicial de anticorpo. As eficiências de captura da IL-6 decrescem com o aumento de moléculas anticorpo imobilizado e consequentemente com a concentração usada. A imobilização de anticorpos na superfície do ouro foi confirmada, sendo o limite óptico de detecção da IL-6, previamente marcada magneticamente e concentrada, 45.5 pM. Para tal, usou-se uma concentração de nanopartículas magnéticas com 250 nm de 4.9 x 106 particulas/µL, um agente de crossliking (DTSSP) e um agente de bloqueio (BSA 5%). O protocolo optimizado foi transferido para a plataforma baseada em chips magnetoresistivos do INESC-MN, sendo detectada uma concentração de 0.11 µM de IL-6, com um sinal de (∆Vligação/Vsensor) de 0.009 ± 0.001 (Vrms/Vrms).
novembro 19, 2012, 9:30
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Orientação
