Dissertação
Integrated purification of monoclonal antibodies directly from cell culture medium with aqueous two-phase systems EVALUATED
A importância de mAbs como novos biofármacos é altamente promissora para o tratamento de várias doenças. Nesta tese,a produção de anti-CD 34 foi gerada utilizando uma linha celular de hibridoma AC133.1. As células foram crecidas em DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino com baixo teor de de imunoglobulina G e um meio isento de soro que facilitaria o processo de purificação. Com DMEM +10% FBS UL IgG, em condições estáticas, foi possível produzir 43 ± 2,5 mg IgG/L e com o meio CD de hibridoma alcançou-se 61 ± 8,6 mg IgG/L. O purificação do anticorpo produzido foi depois estudado usando sistemas de duas fases aquosas, como o processo de integração, a fim de evitar o passo de clarificação. Estudou-se o sistema PEG / dextrano, sem a adição de sal e com a adição de 150 mM e 300 mM de NaCl, a pH diferentes. O efeito do peso molecular do polímero foi estudado, foi utilizado o PEG com um peso molecular de 3350 Da e 6000 Da. O melhor rendimento foi obtido com PEG 6000Da / dextrano contendo 150 mM NaCl, a pH 3, tendo-se recuperado 83 ± 6,5% do IgG com 0,1 ± 0,2% de células. O melhor grau de pureza (86 ± 6,8% na fase de cima) foi obtido para o sistema PEG 6000Da / dextrano, com 300 mM NaCl a pH 3. O aumento de escala foi realizado para o ATPS utilizando o meio CD hybridoma para o sistema PEG(6000Da)/ dextrano pH4, 300mM NaCl.
dezembro 7, 2012, 9:30
Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente
Orientação
CO-ORIENTADOR
Maria Raquel Murias dos Santos Aires Barros
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Catedrático
