Dissertação
Integrated Platform for the Expansion and Neural Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells EVALUATED
A geração de células pluripotentes induzidas humanas foi um dos sucessos mais revolucionários na biologia de células estaminais, permitindo criar tipos de células específicos do paciente a ser tratado, úteis para o tratamento de muitas doenças, incluindo as neurodegenerativas. O trabalho experimental desenvolvido no âmbito desta tese teve como objectivo o estabelecimento e optimização de uma plataforma quimicamente definida e reprodutível para permitir a expansão e diferenciação neural de hiPSCs , bem como a caracterização da população celular obtida após a diferenciação. Seguindo um protocolo de passagem em single-cell (com células dissociadas), determinou-se que a melhor densidade celular para plaquear e expandir as hiPSCs é de 17000 células/cm2. No caso da diferenciação neural, foi possível obter rosetas neurais e estruturas celulares semelhantes ao tubo neural, formadas por aproximadamente 80% de células a expressar o marcador da neuroectoderme, Pax6. Estes resultados foram obtidos cultivando as células em camada aderente na presença de 10 µM de SB-431542 e 100 nM de LDN-193189 num ambiente com uma tensão normal de oxigénio (20% O2) após plaqueamento com uma densidade celular inicial de 20000 células/cm2. Um ambiente com uma baixa tensão de oxigénio revelou uma influência negativa no rendimento dos processos de expansão e diferenciação celular, promovendo a morte celular e resultando numa percentagem menor de células expressando o marcador Pax6, tipicamente expresso em progenitores neurais. É de realçar que os resultados obtidos com a diferenciação das hiPSCs foram validados após diferenciação sob as mesmas condições com uma linha celular de hESCs.
julho 23, 2012, 16:30
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Orientação
