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Dissertação

Identification and characterisation of efflux pumps in Rhodococcus erythropolis EVALUATED

Detalhes: Este trabalho procura demonstrar, pela primeira vez, a presença de bombas de efluxo como mecanismo de defesa em Rhodococcus erythropolis. Vários inibidores de bombas de efluxo (EPIs) conhecidos, tais como Tioridazina (TZ), Verapamil (VP), Carbonilcianeto m-clorofenil-hidrazona (CCCP), Omeprazol (OMP) e Ortovanadato de sódio (Na3VO4), foram usados para avaliar a actividade de efluxo. Tal foi conseguido através da determinação da concentração mínima inibitória (MIC) dos EPIs e dos antibióticos vancomicina e ciprofloxacina, na presença e ausência dos EPIs; e através de fluorometria em tempo real. A acção de bombas de efluxo em R. erythropolis foi indiciada pela diminuição das MICs dos antibióticos na preseça dos inibidores, e demonstrada pelo decréscimo do efluxo de brometo de etídio na presença de EPIs. Como os EPIs utilizados são descritos como inibidores de bombas de eflluxo pertencentes às superfamílias ATP Binding Cassette e Major Facilitator, estes resultados sugerem a presença de proteínas transportadoras pertencentes a estas familias na estirpe DCL14. Estudos anteriores sugerem que a inibição de bombas dependentes da força motriz protónica por EPIs pode envolver não só um efeito direto na bomba mas também no potencial transmembranar. A interferência dos compostos no potencial de membrana foi avaliada por microscopia de fluorescência. Foi mostrado que TZ, OMP e CCCP promovem uma elevada percentagem de células despolarizadas. A maioria das células conseguiram repolarizar a membrana após 1h de exposição a Na3VO4 e VP. Estes resultados indicam claramente a presença de bombas de efluxo como mecanismos de defesa em R. erythropolis.
Keywords: Bombas de efluxo, R. erythropolis, Inibidores de bombas de efluxo, Fluorometria em tempo real, Células despolarizadas, Microscopia de fluorescência

Discussão: junho 4, 2012, 15:0