Dissertação

Optimization of aqueous two-phase systems for human hematopoietic stem cells separation EVALUATED

O presente trabalho teve como objectivo a optimização de um método de separação por afinidade usando sistemas de duas fases aquosas (ATPS) para isolar e purificar as células estaminais hematopoiéticas (HSC) directamente do sangue do cordão umbilical (UCB). Experiências preliminares efectuadas com um sistema células modelo (KG1a) identificou o sistema de separação composto por 5.6% de polietileno glicol (PEG; 8 000 Da)e 7.5% dextrano (500 000 Da) suplementado com 0.15 M cloreto de sódio (NaCl) altamente promissor na presença de um ligando de afinidade. De facto, este sistema mostrou possuir as características apropriadas para a separação específica das HSC. Um anticorpo monoclonal (mAb) contra o antígeno CD34 (anti-CD34) (marcador de células primitivas hematopoiéticas) foi usado como ligando capaz de direccionar a partição das células CD34+ para a fase rica em PEG. Os anticorpos (Ab) foram usados livres ou copolimerizados com polímeros termossensíveis de poli(N-isopropilacrilamida) (poli-NIPAM). O ATPS afinidade selecionado foi utilizado com sucesso para o particionamento específico e recuperação das células CD34+ estaminais/ progenitoras do UCB. Foi possível antigir factores de purificação (PFs) até 241 com apenas um passo de partição, o que faz deste sistema uma alternativa viável para as técnicas tradicionais de processamento UCB como: centrifugação em gradiente de densidade Ficoll e separação magnética. Os dados obtidos sugerem que este método de selecção poderá ser útil para o desenvolvimento da engenharia de células estaminais, proporcionando fácil aplicação e menor custo para a purificação de populações-alvo.
Sistema de duas fases aquosas, Purificação por Imunoafinidade, Separação de células, Células estaminais hematopoiéticas / progenitoras

setembro 30, 2011, 14:30

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Ana Margarida Nunes da Mata Pires de Azevedo

Engenharia Biomolecular e de Bioprocessos (CC. 3312)

ORIENTADOR

Maria Raquel Murias dos Santos Aires Barros

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedratico