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Dissertação

Purification of monoclonal antibodies by phenyl boronate chromatography EVALUATED

Detalhes: Esta tese tem como objectivo estudar a viabilidade do uso da resina boronato aminofenílico (APB) como primeiro passo a jusante na purificação de anticorpos a fim de reduzir os custos de produção, seja através da substituição da cromatografia de proteína A ou reduzindo a carga de impurezas antes desta etapa. O primeiro passo foi estudar a interacção da imunoglobulina humana G (IgG) com os diferentes componentes do ligante. Foi estudado a ligação do IgG e das típicas impurezas proteicas (albumina e insulina) às resinas: contas de vidro (CPG), CPG-aminopropil, CPG-anilina e CPG-APB. Os cromatogramas obtidos mostraram que quando o tampão de ligação é suplementado com 150 mM NaCl, as interacções electrostáticas são minimizadas. A maioria das impurezas proteicas não ligam à resina, tendo o IgG sido recuperado na eluição através de um componente competitivo. Estes estudos identificaram 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 8.5 como o melhor tampão de adsorção. Na etapa seguinte, diferentes tampões de eluição suplementados com grupos diols (sorbitol e manitol) foram avaliados a fim de encontrar uma alternativa para o tampão de eluição padrão (1.5 M Tris-HCl, pH 8.5), tendo sido encontrado como alternativa viável o tampão 50 mM Tris-HCl, 200 mM Sorbitol, 200mM NaCl, pH 8.5. A eficiência do ligante APB foi então comparada com a proteína A, e um processo de purificação combinando os dois passos cromatográficos consecutivos, CPG-APB e CPG-proteína A, respectivamente, foi avaliada. A recuperação de IgG foi consideravelmente menor do que o esperado, sugerindo que será necessário optimizar o processo.
Keywords: anticorpos monoclonais, aminofenil boronato, cromatografia de afinidade, purificação, proteína A

Discussão: outubro 14, 2011, 10:0