Dissertação
Functional analysis of OmpR and FixJ response regulators from Burkholderia multivorans: role in exopolysaccharide biosynthesis EVALUATED
A fibrose quística (FQ) é uma síndrome clínica caracterizada por infeção crónica pulmonar. O complexo Burkholderia cepacia (Bcc) é um grupo de patogénicos oportunistas particularmente temido devido ao desfecho imprevisível que os doentes infetados podem ter. As bactérias do complexo Bcc apresentam diversos fatores de virulência, de entre os quais o exopolissacárido (EPS) cepaciano, produzido pela maioria dos isolados clínicos. Análises à morfologia mucosa dos isolados clínicos de FQ revelaram uma correlação inversa entre a produção de EPS e a progressão da doença, tornando-se importante a compreensão dos mecanismos moleculares por trás deste ON/OFF. Assim, dois isolados clínicos de B. multivorans recuperados, com diferença de 13 anos, de um único paciente com FQ foram crescidos em condições de stress e as colonias que apresentavam menos mucosidade foram recuperadas. Após sequenciação do genoma, seis variantes apresentavam mutações nos genes fixL e fixJ. A caracterização fenotípica levou à conclusão de que as mutações encontradas no fixJ, mas não no fixL, causavam a perda da biossíntese de EPS. De modo a investigar se a biossíntese do EPS podia ser controlada diretamente pela ligação da proteína FixJ à região promotora acima do operão bceBCDEFGHIJ, ensaios EMSA foram realizados. Após diversas tentativas não conseguimos demonstrar esta ligação direta. Mesmo assim, conseguimos demonstrar que estas mutações parecem estar envolvidas na regulação da formação de biofilmes e no controlo catabólico, sugerindo um papel importante destas proteínas na adaptação da Burkholderia ao microambiente do pulmão dos pacientes com FQ.
dezembro 14, 2017, 17:0
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