Dissertação
Functionalization of Extracellular Vesicles EVALUATED
Os exossomas, uma subpopulação de vesículas extracelulares, estão envolvidos na comunicação intercelular de longa distância e têm um grande potencial como novo sistema de transporte de medicamentos para doenças do Sistema Nervoso Central, como a doença de Alzheimer. A doença de Alzheimer é caracterizada pela deposição do peptídeo β-amilóide como placas amiloides, e um dos potenciais tratamentos para esta doença advém do uso da Neprilisina (NEP), uma enzima degradadora do peptídeo β-amilóide. A fim de aumentar as terapias baseadas no exossomas, múltiplas modificações podem ser feitas na superfície dos mesmos. Este trabalho tem como objetivo otimizar metodologias para obtenção de exossomas funcionalizados através da fusão com lipossomas sinteticamente funcionalizados. A fusão entre lipossomas não marcados e lipossomas marcados com fluorescência foi realizada através do método de freeze-thaw. Os resultados demostraram que a funcionalização de lipossomas não marcados com características extrínsecas foi alcançada, e mais tarde, a produção de vesículas hibridas, através da fusão com EVs foi também demonstrada. O método de Click chemistry foi utilizado para a bioconjugação de moléculas como o BDP-azide e PEG-azide à superfície dos lipossomas, a fim de mais tarde funcionalizar os EVs. Esta técnica permite a ligação de diferentes moléculas aos lipossomas, uma vez que qualquer peptídeo conjugado com um grupo azida pode ser ligado aos lipossomas e depois fundido aos EVs. O potencial impacto negativo da utilização do método de freeze-thaw na atividade da enzima NEP foi também quantificado, demonstrando que a enzima NEP não perde atividade significativa após os ciclos de freeze-thaw.
novembro 23, 2021, 10:0
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
ORIENTADOR
iBB - Instituto de Bioengenharia e Biociências, Instituto Superior Técnico
Doutor