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Dissertação

Cultivation of Mycobacteria in Submerged Fermentation: Towards a Reproducible Method for Vaccine Production EVALUATED

Detalhes: A tuberculose é uma doença infeciosa causada por Mycobacterium tuberculosis que afeta milhões de pessoas. A única vacina disponível para a prevenção de doença é a Bacille Calmette-Guérin (BCG), que consiste em M. bovis atenuada, que é o agente causador da TB bovina. Contudo, a eficácia da BCG é variável, sendo uma das razões a formação de agregados celulares, levando a uma quantificação e controlo de qualidade da vacina defeituosa. Neste trabalho, o fenótipo agregativo foi estudado para encontrar condições que permitissem agregados celulares menores e obter células planctónicas, usando M. smegmatis como organismo-modelo. Para tal, o efeito da composição do meio de cultura e temperatura de crescimento foram avaliados. Células expostas a 0.25% (v/v) etanol, metanol ou DMSO apresentaram um decréscimo na velocidade de agregação, o que significa que os agregados celulares formados eram menores. A agregação celular também foi diminuída após a execução de sete choques térmicos sem agitação de 15 min. Adicionalmente, privação de fonte de carbono levou a um decréscimo no tamanho dos agregados celulares. O efeito da suplementação de nitrogénio com compostos de amónio na agregação celular foi estudado, e células planctónicas foram obtidas aquando da suplementação com 50 mM acetato de amónio, cloreto de amónio, ou 100 mM sulfato de amónio. A composição em ácidos gordos dos fosfolípidos da membrana foi avaliada em cada experiência, sendo que a mycobactéria respondeu aumentando ou diminuindo a fluidez da membrana. Surpreendentemente, o aumento da fluidez foi obtido através da introdução de ácidos gordos polinsaturados na membrana celular.
Keywords: Tuberculose, vacina BCG, agregação celular, Mycobacterium smegmatis, composição do meio de cultura

Discussão: novembro 16, 2021, 11:0