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Dissertação

Development of a scalable process for the purification of bacteriophages EVALUATED

Detalhes: O desenvolvimento recente de estirpes bacterianas resistentes a antibióticos levou à necessidade de criar terapias contra infeções severas. O uso de bacteriófagos reemergiu nos últimos anos como uma possível alternativa. Como os fagos são produzidos em culturas bacterianas, a purificação do lisado é um passo importante, de modo a remover contaminantes bacterianos, como proteínas, DNA e endotoxinas. Os métodos de purificação tradicionais estão otimizados para a investigação e é necessário desenvolver novos métodos para a purificação de fagos em larga escala, usando, por exemplo, cromatografia. Neste trabalho, a purificação de uma solução de fagos de contaminantes bacterianos foi estudada, e processos foram identificados para investigação futura. Stocks de fagos foram amplificados e clarificados através de centrifugação ou microfiltração, antes de ser concentrada e diafiltrada. Os stocks foram depois purificados através de diversas abordagens cromatográficas, incluindo troca aniónica, multimodal, exclusão de tamanho e uma estratégia combinada de troca aniónica-multimodal. Após cada ensaio cromatográfico, analisou-se o conteúdo em fagos, proteínas e DNA dos picos. Durante otimização da troca aniónica, o perfil de eluição dos fagos aparenta ter mudado, possivelmente devido a agregação. Contudo, um método otimizado permitiu a recuperação da maior parte dos fagos injetados. Quando uma coluna multimodal foi utilizada, recuperações satisfatórias foram alcançadas, e recuperações totais foram obtidas em cromatografia multimodal após troca aniónica, com remoção de proteínas e DNA bacteriano. O processo combinado permite uma recuperação aceitável e simultaneamente a remoção de impurezas chaves, sendo de interesse para estudos futuros.
Keywords: Bacteriófagos, Terapia fágica, Purificação, Processamento a jusante, Cromatografia

Discussão: novembro 12, 2018, 9:0