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Dissertação

Studies on drug resistance and biofilm formation in Candida glabrata: focus on the implementation and optimization of CRISPR-Cas9 tools for C. glabrata genome editing EVALUATED

Detalhes: Estima-se que as infecções fúngicas invasivas matem cerca de 1,5 milhões de pessoas todos os anos, e o surgimento de Candida glabrata como um organismo patogénico humano particularmente resistente a antifúngicos captou a atenção de investigadores. Nesta dissertação, os mecanismos conhecidos de patogenicidade de C. glabrata são revistos. Especificamente, de entre vários genes associados à aquisição de resistência a antifúngicos e formação de biofilme, é abordado o papel dos factores de transcrição Rpn4, Mar1, Efg1 e Tec1. Numa primeira parte, vários protocolos foram testados para implementar e optimizar um sistema CRISPR-Cas9 de um só vector para a eliminação de genes em C. glabrata. Após optimização, este sistema foi usado com sucesso para eliminar os genes RPN4 e EFG1, tendo como objectivo a sua caracterização funcional para descobrir um potencial papel na resistência a azóis e formação de biofilme, respectivamente. Adicionalmente, dois motivos “GGGGAGG” encontrados no promotor do gene RSB1, previamente identificados como potenciais locais de ligação do Mar1, foram mutados por mutagénese dirigida, demonstrando a sua influência na expressão do gene RSB1 na presença de fluconazol. Uma análise futura da ligação entre o Mar1 e os motivos referidos será necessária para confirmar a hipótese de o Mar1 estar envolvido em respostas a stresse induzido por fluconazol em C. glabrata através da regulação directa do RSB1. Globalmente, este estudo descreve a implementação e optimização da tecnologia CRISPR em C. glabrata, oferecendo material biológico para o estudo do papel de novos participantes na resistência a antifúngicos e formação de biofilme neste organismo.
Keywords: CRISPR-Cas9, Candida glabrata, formação de biofilme, resistência a drogas antifúngicas

Discussão: julho 29, 2020, 10:0