Dissertação
Development of paper-based biosensors for DNA recognition and proteolytic activity EVALUATED
O design de novos testes de diagnóstico mais acessíveis é de grande interesse por razões económicas e de saúde. Estes testes deverão ser simples, portáteis e exigir pequenos volumes de amostra com pouca a nenhuma preparação prévia, para que possam ser aplicados no ponto de tratamento sem necessitar de equipamentos sofisticados. A ubiquidade e facilidade de manuseio do papel fazem dele um bom suporte para este tipo de testes. A combinação com nanopartículas de ouro (AuNPs), que produzem um sinal colorimétrico a olho nu, é uma estratégia para atingir esse objetivo. Neste trabalho, dois testes em papel foram desenvolvidos recorrendo a AuNPs para detecção e utilizando celulose ativada com o módulo de ligação a carbohidratos CBM3-C. Esta proteína foi caracterizada e utilizada para detetar a captura de DNA complementar (cDNA), bem como atividade proteolítica. Para o reconhecimento de cDNA, duas estratégias de conjugação de CBM3:DNA foram exploradas: i) formação de complexo de níquel com oligonucleótidos modificados com NTA via tag de hexa-histidinas e ii) formação de ligação covalente entre um grupo tiol terminal do CBM3-C e oligonucleótidos modificados com maleimida. Os conjugados permitiram reconhecer DNA complementar tanta direta como indiretamente, num sistema de 2 ou 3 oligonucleótidos, respectivamente usando dispositivos microfluídicos delimitados por cera. O conjugado via complexo de níquel consegue distinguir cDNA no sistema de 2 oligonucleótidos, tendo os conjugados preparados por ligação covalente sido menos discriminatórios. CBM3-C foi também usado num ensaio de prova de conceito, medindo a extensão de uma reação proteolítica por uma protease não específica.
setembro 26, 2019, 16:0
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
ORIENTADOR
Duarte Miguel De França Teixeira dos Prazeres
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Catedrático