Dissertação

Development of tools to unravel key metabolic features of Pseudozyma spp. in the production of mannosylerthritol lipids from glucose and xylose EVALUATED

O trabalho desenvolvido nesta tese teve como objetivo desenvolver ferramentas necessárias para compreender as características metabólicas relevantes de Pseudozyma spp. na produção de manosileritritolípidos (MEL), e obter as primeiras informações relevantes do ponto de vista bioquímico e molecular. A fonte de carbono influência de forma diferente a produção MEL por Pseudozyma spp. Comparando as duas estirpes, P. antarctica foi a melhor produtora de MEL nas condições testadas. Juntamente com a fonte de carbono, também foi avaliada a influência da fonte de azoto, a amónia foi prejudicial para a produção MEL. As atividades das enzimas envolvidas em vias metabólicas que contribuem para a produção de MEL, através da produção/consumo de NADPH foram avaliadas. A parte oxidativa da via das pentoses fosfato é, aparentemente, a maior fonte de NADPH, tanto em ᴅ-glucose como em ᴅ-xilose. No entanto, a indução desta via por ᴅ-xilose, em resposta à maior necessidade de NADPH, é muito mais efetiva em P. antarctica. Da análise do genoma de Pseudozyma spp, foram identificados genes envolvidos na produção de MEL e no consumo e produção de NADPH e desenhados pares de oligonucleótidos iniciadores para uso em RT-PCR em tempo real. Em P. antarctica, os níveis de transcrição dos genes envolvidos na produção de NADPH são significativamente superiores em ᴅ-xilose do que em ᴅ-glucose. Também, o EMT1 de P. antarctica (síntese de manosileritritol) é significativamente sobre-expresso em ᴅ-xilose, o que justifica as relativas elevadas concentrações de MEL em ᴅ-xilose, mesmo requerendo reciclagem de carbono através da via oxidativa das pentoses fosfato.
Manosileritritolipidos, NADPH, Pseudozyma spp, ᴅ-glucose e ᴅ-xilose, actividades enzimáticas, análise de transcritos

novembro 25, 2015, 11:30

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

César Simões da Fonseca

Laboratório Nacional de Energia e Geologia - LNEG

Investigador Auxiliar

ORIENTADOR

Frederico Castelo Alves Ferreira

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar