Dissertação
Poly-caprolactone nanoparticles as carriers for delivery of enzymes into cells EVALUATED
A presente dissertação teve como principal objetivo o desenvolvimento de nanopartículas poliméricas como veículos de transporte de enzimas para células. As nanopartículas foram preparadas por nanoprecipitação de policaprolactona (PCL) modificada com óxido de propargil 3-metilpentanoato. A superóxido dismutase e a fosfatase alcalina foram encapsuladas em nanopartículas de PCL e entregues em células HeLa. Pretendeu-se também modular mecanismos celulares, tais como o stress oxidativo e a apoptose, com nanopartículas de PCL. A absorção (por endocitose) por células HeLa de nanopartículas de PCL contendo enzimas encapsuladas foi seguida usando um corante vermelho fluorescente, a rodamina, que permitiu análises e medições por microscopia de fluorescência e citometria de fluxo. Realizaram-se ensaios enzimáticos e celulares para medir a atividade da superóxido dismutase (SOD), após entrega enzimática por nanopartículas de policaprolactona. A produção de peróxido de hidrogénio intracelular foi detetada com um corante verde fluorescente, na presença de 30 µg/ml de lipopolissacárido (LPS). No entanto, os resultados obtidos não foram conclusivos devido a contaminação bacteriana ocorrida durante a síntese das nanopartículas. Foram igualmente realizados estudos por citometria de fluxo e ensaios de viabilidade celular. Os resultados indicaram que nanossistemas PCLSOD protegem as células HeLa do stress oxidativo, aumentando a viabilidade celular. Para a fosfatase alcalina (ALP) observou-se que o encapsulamento em nanopartículas poliméricas de policaprolactona protegeu a atividade enzimática em solução. A análise por microscopia de fluorescência com o substrato Naftol AS-MX revelou o transporte eficiente de nanopartículas PCLALP para o meio intracelular.
julho 14, 2020, 14:0
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
ORIENTADOR
Maria Ângela Cabral Garcia Taipa Meneses de Oliveira
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Auxiliar
ORIENTADOR
Institute für Makromolekulare Chemie – Freiburg University (Germany)
Professor