Dissertação
Super Resolution Imaging of Protein Aggregates in Cell Models EVALUATED
A doença de Parkinson é uma das mais comuns doenças neurodegenerativas no mundo. A agregação de proteínas é uma das possíveis causas que por essa razão leva o mesmo a ser estudado em diversos aspetos como a localização e interação com o meio que o rodeia. Usa-se a microscopia confocal e STED para que seja possível o estudo dos mecanismos que levam à doença. Neste trabalho, usámos células HEK-293T e H4 para reproduzir a resposta e os mecanismos envolvidos. Diversos agregados proteicos foram estudados para a criação de um detalhado método para uso nas diversas técnicas de microscopia. O método foi desenvolvido com vista a suplantar a falta do terceiro eixo, podendo assim obter o volume do agregado e a sua localização. Os resultados da análise revelam um método simples para a obtenção do volume de agregados proteicos nos modelos estudados (proteína Sinfilina-1(Sph1) marcada com EGFP, fragmento fluorescente de GFP – modelo de agregação Sph1GFP - a ⍺-sinucleína (⍺Syn com EPGFP fragmentado com apenas 83 aminoácidos) e proteína Sph1 marcada com o marcador V5 – modelo de agregação SynTWT+Sph1-). Existem ainda diferenças a serem notadas relativamente ao tipo de microscopia usado nomeadamente no volume dos agregados e número de agregados por célula. No modelo de agregação SynTWT+Sph1 parece demonstrar a colocalização entre as proteínas está desfasada no eixo Z.
junho 21, 2022, 17:0
Publicação
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Orientação
ORIENTADOR
Department of Neurodegeneration and Restaurative Research, University Medizin Gottingen, Gottingen, Germany
Professor Catedratico
