Dissertação
Stem Cells in Microfluidics - Controlling the Celular Environment of Microspotted Stem Cells EVALUATED
O principal objectivo deste trabalho consistiu em desenvolver um dispositivo microfluídico capaz de realizar cultura de células estaminais embrionárias de ratinho (mESC), e de avaliar a influência de factores do seu microambiente, à micro-escala. As tecnologias microfluídicas permitem uma redução de custos e de tempo sem precedentes, através da integração de complexos testes biológicos e químicos em dispositivos microfabricados. Através de técnicas de soft lithography, e juntamente com spotting robótico, efectuou-se o spotting de moléculas da matriz extracelular directamente em folhas e microcanais de PDMS para o desenvolvimento de microarrays de mESC. Células HEK 293T foram inicialmente usadas para se optimizarem importantes parâmetros de spotting, como o número de droplets, capacidade celular e diâmetro do spot, e também para se seleccionar a melhor molécula da matriz extracelular. O melhor resultado obtido para esta linha celular foi com laminina, tendo-se testado imediatamente esta molécula com mESC. Spots de laminina definidos sobre uma folha de PDMS e formados por 150 droplets resultaram no melhor microarray de mESC, tendo sido possível manter estas células em cultura durante 4 dias. O microarray foi então transferido para microcanais de PDMS, onde armadilhas de PDMS foram colocadas para prender as células e com isso melhorar a adesão nos spots de laminina, definidos dentro dessas estruturas. A imobilização celular ocorreu com sucesso, tornando o dispositivo numa boa ferramenta para testes imediatos de factores do microambiente celular, e numa boa tentativa inicial rumo a um dispositivo microfluídico final que permita cultura de mESC à micro-escala, a longo prazo.
novembro 22, 2011, 17:30
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
CO-ORIENTADOR
João Pedro Estrela Rodrigues Conde
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Catedratico
