Structure-function study of transmembrane domain 4 of the yeast phosphate transporter Pho84: A SCAM approach A SCAM approach EVALUATED

Detalhes: Em levedura, crescimento num meio sem fosfato contendo glucose leva à entrada em G0 e à sub-regulação dos alvos da via PKA. Readição de fosfato na presença de glucose despoleta a activação rápida da trealase e de outros alvos da PKA através de uma via que requer, para uma activação sustentada, uma fonte de carbono fermentável e um meio de crescimento completo (via FGM). Trabalhos de Giots et al. (2003) sugerem que, para além de levar a cabo o simporte de elevada afinidade de fosfato:H+, Pho84 é um sensor de fosfato da via FGM. Os resultados aqui descritos, obtidos através de cysteine scanning de 28 mutantes no domínio transmembranar 4, evidenciam que, embora o sensing de fosfato por Pho84 esteja relacionado com o transporte do nutriente, Pho84 é, de facto, um sensor de fosfato, já que a mutação de resíduos específicos (F160, A162, P180) incapacita Pho84 de transportar fosfato, mas não de fazer o seu sensing. Os resultados obtidos levam-nos também a concluir que o DTM4 é susceptível a mutações por cisteína. Para além disso, usando o método SCAM, determinou-se a acessibilidade do DTM4 a solvente usando o composto MTSEA. Com esta abordagem, dois mutantes foram encontrados (F160C, F166C), capazes de activar da trealase, cuja capacidade de sinalização através da via FGM é bloqueada na presença de MTSEA. Isto indica que estes resíduos estão expostos a solvente, e para além disso, os resultados obtidos apoiam a hipótese de que F160 faz parte do canal de transporte de fosfato de Pho84.

Discussão: setembro 27, 2007, 17:0

Orientação

AUTOR

Ana Margarida Lago Agrochão (ist151832)

CO-ORIENTADOR

Yulia Popova

Katholieke Universiteit Leuven, Faculty of Sciences, Department of Biology

Especialista

ORIENTADOR

Isabel Maria De Sá Correia Leite de Almeida

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Catedrático