Dissertação
Characterization of Enzymatic Production of Glycolipids EVALUATED
Este trabalho pretende produzir glucolípidos a partir de soforolípidos usando a actividade de glucosidase do complexo naringinase de Penicillium decumbens. As condições óptimas de reacção para a actividade de glucosidase foram testadas usando beta-NPG e soforolípidos como substracto. Foi determinado pH3 como sendo o pH óptimo para ambos os substratos, enquanto que a temperatura óptima foi de 50ºC e 60ºC para soforolípidos e beta-NPG, respectivamente. Foram também elaborados testes de estabilidade e a enzima mostrou ser estável nas condições óptimas (20% de diminuição da actividade enzimática inicial). A enzima mostrou seguir a cinética de Michaelis-Menten. Usando beta-NPG Vmax, KM e kcat foram 0,821mM/min, 1,97mM e 59,11min-1, respectivamente, enquanto que usando soforolípidos Vmax, KM e kcat foram 0,092mM/min, 0,668mM e 6,62 min-1, respectivamente. Concluiu-se que a actividade de glucosidase da naringinase é inibida competitivamente por glucose (Ki=19,7mM). A adição de catiões resulta na inibição da actividade enzimática. O aumento da molaridade do tampão resulta numa diminuição da actividade enzimática. A naringinase possui actividade de glucosidase e de ramnosidase. A massa molecular para a subunidade de glucosidase foi estimada ser cerca de 72kDa usando SDS-PAGE, enquanto que a subunidade de ramnosidase foi estimada ser cerca de 48 kDa. Através de técnicas de Native-PAGE concluiu-se que a naringinase terá uma estrutura tetramérica. Após conhecidas as condições reaccionais óptimas, procedeu-se à conversão enzimática de soforolípidos em glucolípidos. A pH3 e a 50ºC houve formação simultânea de ácidos gordos livres e de glucolípidos. Contudo a pH7 a posterior hidrólise de glucolípidos foi minimizada.
outubro 29, 2007, 11:0
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Orientação
ORIENTADOR
Maria Manuela Regalo da Fonseca
Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)
Professor Associado