Dissertação

Molecular Mechanisms of Exocytosis: Role of Cdc42 and Actin in late steps of Regulated Exocytosis Role of Cdc42 and Actin in late steps of Regulated Exocytosis EVALUATED

O objectivo desta tese é compreender o mecanismo pelo qual a actina intervém na exocitose dos grânulos de secreção (SG). As Rho GTPases são reguladores chave do citosqueleto de actina, tendo a Cdc42 mostrado facilitar a exocytose em células neuroendócrinas. Para determinar a importância a sua acção na secreção regulada, o gene foi silenciado em células BON e PC12. A eficiência do silenciamento da expressão de Cdc42 foi estimada de 60±8% em células BON e 67±22% em PC12. Efeitos morfológicos são visíveis em células BON com estes níveis de silenciamento. Adicionalmente, surgem novas estruturas de actina: formam-se densos cabos paralelos à membrana plasmática. Uma descida no número de células com enriquecimento periférico de SG pode ser observada nas células silenciadas (~20%). Contudo, ao recorrer ao TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy), é possível observar um aumento na densidade granular junto à membrana plasmática em condições de silenciamento, pelo que, Cdc42 deve desempenhar um papel no número de grânulos de secreção nas zonas enriquecidas. Ensaios de secreção não indicaram nenhuma inibição considerável na secreção de serotonina triciada em células deficientes em Cdc42. Contudo, estas observações entram em desacordo com os resultados publicados em Malacombe et. al (2006) que se referem a uma diminuição da secreção da hormona de crescimento. Uma vez que neste trabalho foi estudada a secreção de uma pequena molécula em vez de uma macromolécula, a Cdc42 pode estar envolvida no mecanismo de extensão de poro que permite a libertação de moléculas maiores.
exocytose, grânulo de secreção, actina, Cdc42 GTPases, células BON, células PC12

Setembro 10, 2007, 9:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

CO-ORIENTADOR

Claire Desnos

Institut de Biologie Physico-Chimique, Univ. Paris 7

Especialista

ORIENTADOR

Álvaro Augusto Marques Tavares

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Auxiliar